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    蛋白质N端测序样品要求
    点击次数:516 发布日期:2019-3-27  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
    检测仪器:岛津 PPSQ-31A 蛋白多肽自动测序仪 
    一、 蛋白质N端测序的主要应用:
    1.样品:蛋白质,多肽样品的氨基酸序列测定
    2.优势?#32791;?#36830;续测定 60 个以上的氨基酸序列
    3.来源:天然提取(动物/植物/微生物);合成多肽;重组蛋白等
    二、 样品要求:
    1.纯度:>95(基于摩尔数)
    2.含量:50-100pmol(液体体积控制在 20ul)
    3.修饰封闭:N 端未被封闭
    4.样品形式:液体;干粉;PVDF 膜
    5.无干扰物:蛋白酶;氨基酸;胺;盐分;乙醛;去污剂等
    三、 客户提供信息:
    1.纯度:纯度检测结果及图谱信息
    2.修饰:样品可能修饰情况
    3.制备方法:如 SDS,HPLC 及其它方式
    4.验证目的:提供理论序列
    5.表观分子量
    其它注意事项:
    1.邮寄要求:使用干冰冷冻保护
    2.液体样品:
    可用溶剂:蒸馏水、TFA 水溶液、醋酸水溶液、?#20202;?#27700;溶液以及三甲基胺水溶液。
    不可用的溶剂:氨盐、Tris 等,含有 1 级、2 级胺的盐溶液,含有 SDS 的溶液
    3.固体样品:
    干燥处理的样品,请先确认干燥处理前的溶剂中不含有上述不兼容的溶剂。如果含有不兼容的溶剂?#20445;?#35831;告知我方检测人员。
    4.PVDF 膜:注意以下方面
    1)样品量:5-8 条泳道,每条泳道的样品尽量用最高浓度样品,上最大体积(尽量使条带长胖为正常的 2-3 倍宽度)
    2)硝酸纤维素膜:具有耐药性,不能使用。
    3)在电转印中使用的缓冲液尽可能不含甘氨酸。在使用了含甘氨酸的缓冲液?#20445;?#35831;告知我方检测人员。
    4)染色剂推荐使用考马斯亮蓝(CBB-R250)。
    5)推荐使用下列的 PVDF 膜:
    厂家 产品名称 规格 产品代码
    日本 Genetex   8.5x9cm,10pcs PVM020C8590
        13x14cm,10pcs PVM020C1314
        20x20cm,20pcs PVM020C2020
        20cmx3m,1roll VM020C3R
    PEBiosystems ProBlott 20x20cm,10pcs 400994
    MiniProBlott 10x10cm,10pcs 401194
    BIORAD   7x8.4cm,10pcs 162-0186
        10x15cm,10pcs 162-0180
        20x20cm,10pcs 162-0181
        26cmx330cm,1roll 162-0184
    来源:卡梅德生物科技(天津)有限公司
    联系电话:022-82164980
    E-mail:[email protected]

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