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    小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)怎么养
    点击次数:1525 发布日期:2019-3-26  来源:本站 仅供参考,谢绝转载,否则责任自负
    MC3T3-E1 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞
    Catalogue No. C1047
    Product Format a T25 flask
    Culture Properties 贴壁
    Complete Growth Medium 89%H-DMEM+10%FBS+1%双抗
    Atmosphere air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
    Application Cells and cancer research
    NOTE FOR RESEARCH USE ONLY。

    Components
    Item Specifications
    a T25 flask 2X106
    Manual 1 copy
     
    Operation steps for cell culture
    1、吸走用于培养基,加入 3-5mL PBS 后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;

    2、吸干净 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,轻轻摇?#38395;?#20859;皿使胰酶浸没细胞表面,培养瓶放 37 度培养箱消化;(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止,禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞?#26412;?#37327;轻柔,不要吹出大量气泡。)

    3、加入 6-8ml 完全培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;

    4、将混匀的细胞 1000rpm(约 150g)离心 3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬 37 度培养箱继续培养;

    传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞?#35270;?br /> 1:3-1:4 传代,生长较慢的细胞可以 1:2 传代。

    Cell cryopreservation
    1、冻存液:92%完全培养基+8%DMSO(可以根据实验室条件自行选择)

    2、降温步骤:4 度 10min,-20 度 2h,-80 过?#36141;?#28082;氮保存。

    Tips
    1、细胞经过运输后,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片,是正常现象。贴壁细胞  可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900-1000rpm(约 150g)离心 3min,弃上清。加5mlPBS 重悬细胞,再 900-1000rpm(约 150g)离心 3min,用新?#23454;?#23436;全培养基重悬接?#20540;?#26032;的培养瓶。第二次 PBS 重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略 PBS 重悬的步骤;如果碎片很多,建议 PBS 多洗几次。

    2、细胞生长不均时,可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。

    3、细胞生长缓慢时,可以选择提高血清浓度培养(最高不超过 20%),也可以根据细胞生长状态, 选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

    4、不同细胞贴壁性差异比较大,所以消化时间差别较大,20s-10min  均有可能,具体以细胞消化?#36739;?#20114;分离但未脱落,并可以轻轻吹下为准,严禁消化到细胞完全漂浮。户消化过度导致细胞   死亡、漂浮、生长缓慢, 不提供免费售后服务。

    5、干冰发货均为两支,客户先复苏一支,若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。客户同时复苏两支均状态不佳, 我方不提供免费售后服务。

    6、细胞状态正常时,应尽快冻存细胞保种,冻存后应随机抽取一支检测冻存效果。方不对客户 冻存细胞导致死亡负责, 客户冻存细胞死亡不提供免费售后服务。

    Notice:
        客户收到细胞有任?#25105;?#38382;请及时致电我们,细胞收到后 1 周内没有任何电话,或其他形?#20132;?#35775;, 默认为细胞质量?#26179;?#39064;,之后出了任何问题不给予免费售后。细胞免费售后只提供一次,若重发后再?#38395;?#20859;死亡不再免费补发,细胞收货时已经死亡或密度不足的除外。
    来源:武汉菲恩生物科技有限公司
    联系电话:027-87384275
    E-mail:[email protected]

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